Agilent安捷倫液相色譜使用問題與解決方法

1 、如何成為真正的液相高手
（1）、一定要珍惜儀器廠商提供的各種培訓(xùn)，因?yàn)樗麄兊呐嘤?xùn)很有針對(duì)性，而且很專業(yè)。
（2）、要多做，液相是一個(gè)比較復(fù)雜的系統(tǒng)，在做樣的過程中，總會(huì)遇到各種問題，通過自己的大腦解決問題，慢慢積累就會(huì)穴道很多東西。其次要敢于動(dòng)手，不要總擔(dān)心會(huì)把儀器弄壞，拆儀器的時(shí)候細(xì)心一點(diǎn)就好了，記著各個(gè)部件的順序，連接方式。動(dòng)手次數(shù)多了，成功的機(jī)會(huì)就多了，也就更有信心了。
（3）、要看一些相關(guān)理論的書籍，要了解一些關(guān)于液相的分離原理，如何優(yōu)化色譜系統(tǒng)和峰形，能夠自己解決一些分離的問題。這樣才是一個(gè)液相高手。
如果只是會(huì)很熟練的使用工作站和維修儀器，排除故障，我覺得這只是一個(gè)操作高手，而不是一個(gè)真正的液相高手。

2、新裝82341 GPIB 板，如何與ChemStation 通訊?
在 LC ChemStation CD-ROM 中有安裝說明，還包括驅(qū)動(dòng)程序安裝信息。請(qǐng)?jiān)?Windows® Explorer 中查看子目錄： \Manuals\Installation\LC Systems。您在此處可找到《安裝手冊(cè)》，其中包含有關(guān)如何安裝 GPIB 板以及如何調(diào)用驅(qū)動(dòng)程序的逐步操作說明。

3、為什么進(jìn)樣后在工作站在線圖譜上看不到紅色開始線？
ChemStation 軟件有一個(gè)“在線圖譜”窗口，在此窗口中可顯示從所連接的檢測(cè)器接收到的所有信號(hào)。當(dāng)進(jìn)樣樣品時(shí)，會(huì)在“在線圖譜”窗口中顯示一條豎直的紅色“開始線”。這條紅色線標(biāo)志著啟動(dòng)該軟件進(jìn)行原始數(shù)據(jù)的收集。如果不顯示這條紅色線，則不會(huì)收集數(shù)據(jù)。 如果不顯示“開始線”，請(qǐng)檢查檢測(cè)器上的遙控電纜（如果是 1050 或 1090 系列液相色譜儀的話）。如果缺少遙控電纜，則需要進(jìn)行安裝。如果安裝了模-數(shù)轉(zhuǎn)換箱或板 (35900 ADC)，則需要從模-數(shù)轉(zhuǎn)換設(shè)備到液相色譜儀拉一根遙控電纜。檢查所有的 CAN 電纜，確保它們都連接到 1100 系列液相色譜儀上

4、完美的波長(zhǎng)如何選擇
做一個(gè)新的方法，關(guān)鍵是選擇好的儀器條件，更關(guān)鍵的是波長(zhǎng)正確。但是怎樣的波長(zhǎng)才算是完美的那，比如說我已經(jīng)作了全掃描，那么怎么去選擇波長(zhǎng)哪？？？一般選擇最大吸收波長(zhǎng)為檢測(cè)波長(zhǎng),當(dāng)然也要結(jié)合自己的實(shí)際情況來中和一下如果要達(dá)到最大檢測(cè)靈敏度，最大吸收波長(zhǎng)是首位選擇。如果你使用的是DAD，那么建議你將Sample WL設(shè)定為最大吸收波長(zhǎng)，Bandwidth不能低于你設(shè)定的slit的值。默認(rèn)推薦的Bandwidth為半峰寬。如果你在一次分析中有最大吸收波長(zhǎng)不同的物質(zhì)需要同時(shí)檢測(cè)，可以使用檢測(cè)器的Timetable進(jìn)行波長(zhǎng)的切換避免選用低波長(zhǎng)，波長(zhǎng)越長(zhǎng)越容易做

5、柔性不銹鋼毛細(xì)管線外面的彩色標(biāo)記是什么意思？
安捷倫柔性不銹鋼管線外部的彩色標(biāo)記表示管的內(nèi)徑 (ID)： 紅色 表示內(nèi)徑為 0.12mm 或 0.005 英寸。 綠色 表示內(nèi)徑為 0.17mm 或 0.007 英寸。 藍(lán)色 表示內(nèi)徑為 0.25mm 或 0.010 英寸。 橙色 表示內(nèi)徑為 0.50mm 或 0.020 英寸。

6、更換活塞密封圈后，建議采用什么磨合程序？
注意這個(gè)程序適合于反相密封圈，但不適合于正相密封圈。還會(huì)損壞正相密封圈。 安裝新的密封圈后，進(jìn)行最初的“磨合”期。在至少 350bar 的反壓下泵入異丙醇 15-30 分鐘。這要通過使用原來的色譜柱或陰尼管線來產(chǎn)成壓力.。 有關(guān) 1100 系列 LC 泵的密封圈磨合程序，請(qǐng)參見此附件。

7、1050和1100 系列 LC 泵的活塞密封圈和活塞的部件號(hào)是什么？
舊部件號(hào) 新部件號(hào) 活塞密封圈 5062-8516 5063-6589 (2pk) 活塞 5062-2441 5063-6586 注意：同時(shí)使用新的活塞和密封圈時(shí)，不再需要固定器 (01018-22706)。

8、為什么燈不亮？
很可能是燈老化或燈壞了。請(qǐng)按照下列診斷方法對(duì)檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)試。如果需要，則請(qǐng)更換燈。 如果問題依然存在，則請(qǐng)致電安捷倫科技公司。

9、什么原因?qū)е乱合嗌V儀壓力過高？
可能的原因：
1. 排氣閥里面的 PTFE 濾蕊堵塞。
2. 壓力上限設(shè)置太低。
3. 壓力傳感器堵塞。
建議的措施：
1. 打開排氣閥。如果壓力依然很高，則更換排氣閥內(nèi)的 PTFE 濾芯。
2. 查看軟件的壓力上限設(shè)置并確保設(shè)置值適于分析。
3. 檢查系統(tǒng)內(nèi)的堵塞部位。（如下所述） 要檢查是否堵塞，請(qǐng)采用隔離系統(tǒng)的方法來排除故障： 將安裝的色譜柱、預(yù)色譜柱和預(yù)色譜柱過濾器摘開。
①. 如果壓力恢復(fù)到正常值，則在色譜柱的位置安裝 ZDV 接頭。 A 如果壓力正常，則色譜柱、預(yù)色譜柱或過濾器是產(chǎn)生問題的原因。請(qǐng)進(jìn)行更換。 B 如果壓力仍然很高，則在色譜柱的另一端查找堵塞位置（例如：通入檢測(cè)器或從其通出的管路）。
②. 如果取出色譜柱后壓力依然很高，則檢查從排氣閥到自動(dòng)進(jìn)樣器的管路。如果壓力正常，則使用進(jìn)樣步驟命令將自動(dòng)進(jìn)樣器的進(jìn)樣閥切換到旁路狀態(tài)。 A 如果壓力正常，則說明自動(dòng)進(jìn)樣器堵塞。請(qǐng)檢查針、針座、針座毛細(xì)管和轉(zhuǎn)子密封墊。 B 如果壓力依然很高，則檢查從進(jìn)樣六通閥到色譜柱入口之間的管線.。

10、用不同批號(hào)的色譜柱后如何對(duì)分析方法進(jìn)行測(cè)試并確認(rèn)可用此柱？
首先，在色譜柱包裝盒的外面找到它的批號(hào)。批號(hào)的字體比較小，通常在條形碼的下面。批號(hào)通常以字母“B”開頭，后面是 5 位阿拉伯?dāng)?shù)字。例如，下面示例中的色譜柱批號(hào)為 B99091。 如果找不到包裝盒，則查看色譜柱標(biāo)簽上的序列號(hào)。要從序列號(hào)來確定批號(hào)，請(qǐng)撥打安捷倫科技公司 HPLC 色譜柱技術(shù)支持的電話。他們會(huì)請(qǐng)公司生產(chǎn)部門來查詢批號(hào)，同時(shí)確定其它哪些批號(hào)的色譜柱可用。 獲得所需的批號(hào)或知道您的批號(hào)后，可使用以下步驟進(jìn)行訂購(gòu)： 從安捷倫科技公司。使用特殊的部件號(hào) 899999-888, 該號(hào)碼表示此訂單是專用色譜柱。 說明要訂購(gòu)的色譜柱的類型、尺寸和填料粒度大小，包括通用部件號(hào)。指出您希望色譜柱是哪個(gè)批號(hào)，或者哪個(gè)批號(hào)的色譜柱不能用。示例說明: 部件號(hào) 899999-888 Eclipse XDB-C18 分析色譜柱，4.6mm x 250mm，(963967-902) 除了批號(hào)為 B99091 和 B99079 的專用色譜柱 用于方法確認(rèn)目的的色譜柱

11、如何避免峰拖尾和峰分叉？
與色譜柱相關(guān)的原因及處理方法
1 色譜柱污染; 處理方法:清洗或更換色譜柱
2 色譜柱填料有問題;處理方法:反沖色譜柱或更換柱頭過濾片
3 色譜柱中間出現(xiàn)間斷;處理方法:更換色譜柱或填充空隙
4 保護(hù)柱失效;處理方法:更換保護(hù)柱
5 樣品分布差;處理方法:改進(jìn)色譜柱進(jìn)口的設(shè)計(jì)
6 與色譜柱無關(guān)的原因：柱外體積大、樣品過量、流動(dòng)相組分（添加劑、pH值、緩沖液濃度）改變。

12、什么原因?qū)е乱合嗌V出現(xiàn)神秘峰”？
與色譜柱相關(guān)的原因：
1 色譜柱污染; 處理方法:清洗或更換色譜柱
2 保護(hù)柱失效; 處理方法:更換保護(hù)柱
3 與色譜柱無關(guān)的原因：流動(dòng)相溶不純、樣品里有其他成分、系統(tǒng)里有氣泡、電路問題。

13、什么原因?qū)е轮Вɡ碚撍鍞?shù)）下降？
與色譜柱相關(guān)的原因：
1 色譜柱中間出現(xiàn)間斷;處理方法:使用類似的填料填充空隙或更換色譜柱
2 保護(hù)柱無法再用;處理方法:更換保護(hù)柱
3 其他可能的原因：柱外體積大、進(jìn)樣的樣品量大、樣品溶劑強(qiáng)度比流動(dòng)相大、流動(dòng)相的改變。

14、改變填料孔徑大小對(duì)液相色譜分離有什么影響？
填料孔徑越小，允許的流動(dòng)相線速度越高。最佳流動(dòng)相線速度取決于固定相的顆粒大小。在最佳線速度時(shí)，色譜柱生成的理論塔板數(shù)最多。對(duì)于內(nèi)徑為 4.6mm 的色譜柱，10um 的顆粒流動(dòng)相線速度為 0.75ml/min 或 5um 的顆粒流動(dòng)相線速度為 1.5ml/min 時(shí)，塔板數(shù)最多。

15、改變色譜柱直徑對(duì)液相色譜分析有什么影響？
如果色譜柱直徑減半，則靈敏性增加四到五倍（假設(shè)進(jìn)樣量不變）。例如，等量的樣品進(jìn)樣到內(nèi)徑為 2.1mm 的色譜柱比進(jìn)樣到內(nèi)徑為 4.6mm 的色譜柱所生成的峰高 5 倍左右。 只要線性流動(dòng)保持不變，則柱效率、理論塔板數(shù)、反壓和分析時(shí)間等參數(shù)均與色譜柱內(nèi)徑的減小無關(guān)。

16、改變填料顆粒大小和色譜柱的長(zhǎng)度對(duì)液相色譜分離有什么影響？
如果填料顆粒大小減半，則理論塔板數(shù)加倍（假設(shè)柱長(zhǎng)不變）。如果填料顆粒大小減半，則柱壓增加為原來的四倍。 如果柱長(zhǎng)加倍，則理論塔板數(shù)加倍。如果柱長(zhǎng)加倍，則分析時(shí)間加倍。隨著柱長(zhǎng)增加，柱壓也線性地增加。 以下是一個(gè)根據(jù)上述信息選擇色譜柱的示例： 一個(gè)裝填 10um 填料的長(zhǎng)度為 200mm 的色譜柱可生成 6000 塊理論塔板，這是在很多情況下能提供比較適當(dāng)?shù)姆蛛x的色譜柱效率。將顆粒大小由 10um 減小到 5um，柱長(zhǎng)仍為 200mm，則可生成 12000 塊理論塔板。然而，這個(gè)色譜柱可生成相當(dāng)于原來四倍的柱壓。通常情況下不需要生成 12000 塊塔板，因此柱長(zhǎng)可減半至 100mm，結(jié)果生成 6000 塊塔板，同時(shí)分析時(shí)間也縮短一半；柱壓僅比最初裝填 10um 填料的長(zhǎng)度為 200mm 的色譜柱高兩倍。

17、能否提供一種與我使用的LC 色譜柱相同的色譜柱？
即使用同一種固定相，不同廠商的液相色譜柱也可能具有不同的保留時(shí)間。 雖然這里提供了一些不同廠商的色譜柱的參考數(shù)據(jù)，但這些數(shù)據(jù)在不同的色譜條件下會(huì)有所不同。我們通常根據(jù)您的應(yīng)用情況，向您推薦一種其它的色譜柱。在此之前，我們需要您提供以下信息： 樣品的詳細(xì)信息（樣品的成分和要分析的成分）； 是否可以接受液相色譜條件的改變； 能否對(duì)您的方法進(jìn)行一些調(diào)整。 如果您不能接受分析條件和/或保留時(shí)間的改變，則應(yīng)該繼續(xù)使用目前的色譜柱。

18、如何選擇液相色譜保護(hù)柱？
保護(hù)柱的作用是用來防止分析柱被一些微粒物質(zhì)堵塞,及在色譜柱上強(qiáng)吸附組分在色譜柱上吸附。為防止樣品的雜質(zhì)不進(jìn)入色譜分析柱,不出現(xiàn)不必要的峰展寬，保護(hù)柱與分析柱的體積比應(yīng)在 1:15 至 1:25 之間。 在理想的情況下，保護(hù)柱的填料應(yīng)與分析柱相同，以確保得到分析柱較好的色譜圖。盡量使保護(hù)柱與分析柱近似。在我們的目錄里，將分析柱和與其配套的保護(hù)柱列在一起。

19、色譜圖上出現(xiàn)鬼峰。如何消除？
可能的原因有：
1. 上次進(jìn)樣遺留組分產(chǎn)生
2. 有污染
3. 有氣泡
4. 色譜柱問題
5. 保護(hù)柱失效
建議用戶:
1. 做樣品后應(yīng)保證有足夠時(shí)間沖洗色譜柱,。有必要的話在運(yùn)行結(jié)束后使用更強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱。
2. 洗脫原色譜柱中的原有污染。
3. 為確保系統(tǒng)中沒有氣泡，只使用徹底脫氣后的溶劑。
4. 更換色譜柱。
5. 更換保護(hù)柱。
6. 檢查流動(dòng)相純度。
7. 檢查樣品中的其他成分.

 
20、我的色譜圖上的峰有拖尾現(xiàn)象。如何改善峰形？
可能的原因：
1. 系統(tǒng)內(nèi)的死體積大
2. 樣品在色譜柱上有吸附
3. 色譜柱使用時(shí)間很長(zhǎng)
建議用戶：
1. 盡量減少流動(dòng)相管線的死體積，確保管線接頭的連接合適減小死體積，由于不同生產(chǎn)廠家的管線的接頭和密封墊圈有可能不一樣，盡量使用安捷倫公司的管線接頭和密封墊圈。
2. 使用洗脫更強(qiáng)的流動(dòng)相
3. 更換新色譜柱

21、什么原因?qū)е禄€波動(dòng)？
基線波動(dòng)有可能與實(shí)驗(yàn)室的溫度及濕度變化有關(guān)系。需確保室溫及濕度穩(wěn)定，將儀器從通風(fēng)櫥中取出，并將色譜柱和毛細(xì)管進(jìn)行隔熱保溫。

22、什么原因?qū)е禄€毛刺？
這很有可能是流動(dòng)池內(nèi)有氣泡。請(qǐng)先停泵來進(jìn)行確認(rèn),如果毛剌消失，則很有可能是由于流動(dòng)池內(nèi)有氣泡。需要沖洗流動(dòng)池。如果毛剌仍然存在，則需檢查檢測(cè)器本身的電噪音有關(guān)。如果需要更多幫助，則請(qǐng)致電安捷倫科技公司。在中國(guó)，請(qǐng)撥打800 820 3278。

23、如何減少基線噪音？
無規(guī)律噪音可能與污染有關(guān)。請(qǐng)沖洗色譜柱，對(duì)樣品做合適的前處理以避免污染，并使用 HPLC 級(jí)別的溶劑。 連續(xù)噪音有可能由檢測(cè)器或泵造成。要確定問題是否發(fā)生在檢測(cè)器還是在泵，請(qǐng)先關(guān)泵停掉流量，監(jiān)測(cè)基線。如果此時(shí)基線平穩(wěn)，則噪音可能與泵有關(guān)系。使用 ChemStation 在線診斷或 LC 手持控制器檢查泵方面的故障。如果停泵后噪音繼續(xù)存在，則說明噪音與檢測(cè)器有關(guān)。首先，請(qǐng)嘗試更換燈。如果問題依然存在，則請(qǐng)與安捷倫科技公司聯(lián)系。在中國(guó)，請(qǐng)撥打800 820 3278。

24、如何避免液相基線飄移？
基線向上飄移表明系統(tǒng)中有污染。請(qǐng)沖洗色譜柱，凈化樣品，然后使用新溶劑。 向下飄移通常是由于檢測(cè)室或柱箱中的溫度波動(dòng)的原因。減小室溫變化，將儀器從通風(fēng)櫥中取出，并將色譜柱和毛細(xì)管保溫隔熱。向下飄移也可能由于溶劑的純度不是 HPLC 級(jí)別的溶劑而且此純度低的溶劑在紫外有吸收。

25、如何排除流動(dòng)相/流動(dòng)池中的氣泡？
避免流動(dòng)相中產(chǎn)生氣泡的最佳方式是將流動(dòng)相經(jīng)脫氣裝置進(jìn)行脫氣。如果沒有脫氣裝置，則可以在流動(dòng)相溶劑瓶中通入氦氣進(jìn)行脫氣。也可以在檢測(cè)器的出口端加一根細(xì)管線以調(diào)節(jié)流動(dòng)池中的背壓，但必須注意不要超過流動(dòng)池的最大壓力，否則會(huì)造成流動(dòng)池漏液或流動(dòng)池?fù)p壞。 如果流動(dòng)池中出現(xiàn)氣泡，則先摘下色譜柱，用一根管線直接將流動(dòng)相接入檢測(cè)器的入口。將異丙醇以較大的流速注入流動(dòng)池。 直到基線上看不到尖峰為止。氣泡就應(yīng)該清除掉了。